Revista Farmespaña Industrial - Especial Cannabis Medicinal

¿Cómo se mantiene la fase estacionaria líquida dentro de una columna de LC? Las columnas clásicas de LC están hechas de forma sencilla: un cilindro (de acero inoxidable en HPLC y de plástico o vidrio en Cromatografía Flash) con una entrada y una salida en cada extremo, lleno de una fase es- tacionaria sólida, normalmente de sílice. La columna CPC también tiene una entra- da y una salida para la fase móvil, pero ahí acaban las similitudes con una columna HPLC. Para poder mantener una fase del sis- tema bifásico dentro de la columna, se utiliza un campo centrífugo y discos de separación especialmente diseñados. La columna CPC consiste en un número de discos, dispuestos en un rotor (Imagen 1). El rotor comienza a girar para crear la fuerza centrífuga que retiene la fase estacionaria. Los discos están formados por una serie de celdas unidas entre sí por un fino canal. Una columna CPC consta de más de mil celdas con un sello giratorio en cada extremo para conectar la co- lumna giratoria con el sistema de bombeo, el detector y otros componentes del sistema. Una válvula permite cambiar la dirección del flujo y, por lo tanto, el sistema CPC fun- cionará en modo ascendente, donde la fase más ligera es la fase móvil o en modo des- cendente cuando la fase más pesada es la fase móvil. Esto permite tanto el modo nor- mal como reverso sin necesidad de sustituir la columna. ¿Cómo se produce la separación dentro de la «columna» de CPC? El efecto cromatográfico en la CPC se basa en la constante de distribución, (o relación de partición, Kd). Se trata de la constante de equilibrio para la distribución de un analito en dos disolventes inmiscibles. Para un com- puesto concreto, es igual a la relación entre su concentración molar en la fase estaciona- ria y su concentración molar en la fase móvil según la ecuación Kd= [a]Fase estacionaria/ [a]Fase móvil. Un Kd de 1 representa una partición igual entre la fase móvil y la estacionaria. Para efectuar una separación CPC, el analito de interés debe estar entre Kd 0,5-5. Si el Kd es demasiado bajo, (menos de 0,5) el ana- lito queda retenido en la fase móvil y no se produce la separación, si es demasiado alto, (más de 5) el analito queda retenido en la fase estacionaria. El sistema de disolventes puede entonces determinarse en función de los coeficientes de partición de todas las moléculas que de- ben separarse. Purificación eficiente mediante CPC El CPC es un método muy eficiente que requiere tiempos de ejecución cortos (por ejemplo, 30 minutos) para purificar com- puestos de una mezcla compleja con una pureza analítica de hasta el 98%. Se pueden utilizar caudales de elución más altos, lo que permite tiempos de análisis más rápidos, aumentando así la productividad. El método se puede ampliar fácilmente para procesar de forma eficiente desde miligramos hasta kilogramos de un producto, a diferencia de la HPLC preparativa y la cromatografía flash, que pueden requerir cambios sustanciales de fase estacionaria cuando se pasa a la pu- rificación a gran escala. Dado que las columnas CPC se basan en una fase estacionaria líquida, no necesitan ser sustituidas como las columnas y car- tuchos basados en sílice que se utilizan en los métodos de cromatografía estándar. La columna CPC puede cargarse con diferentes disolventes para crear la columna necesaria para un compuesto objetivo concreto, y los parámetros de purificación pueden ajustarse según el nivel de pureza deseado. Dado que no se produce una absorción irreversible de los compuestos, como ocurre con las colum- nas basadas en sílice, la columna CPC puede reutilizarse tras su enjuague, lo que supone un importante ahorro de costes. En un estudio a pequeña escala, se inyec- taron 5 gramos de extracto crudo de cáñamo en un sistema de purificación Gilson CPC 250 PRO y PLC 2250. Utilizando este método de un solo paso, se obtuvieron 205 miligramos de CBD con una pureza de hasta el 98%, se- gún se determinó en el análisis de HPLC, lo que demuestra la eficacia del CPC para la purificación de compuestos de cannabis ◉ Purificación 80 FARMESPAÑA INDUSTRIAL · especial CANNABIS MEDICAL