Revista Farmespaña Industrial - Especial Cannabis Medicinal

En contraste, la técnica HPLC-DAD/MS ha ganado aceptación como el método más óptimo para la cuantificación precisa de cannabinoides en material vegetal y produc- tos derivados, debido a su alta selectividad, sensibilidad y capacidad para distinguir entre formas ácidas y neutras sin degradar- las. Esta metodología ha sido validada por la AOAC a través del Cannabis Analytical Science Program (CASP) y ha sido citada por el Departamento de Agricultura de EE. UU. (USDA) en 2019 como el método oficial reco- mendado para la determinación de niveles de THC en productos de cáñamo. Químicamente, los fitocannabinoides ma- yoritarios comparten un esqueleto terpe- nofenólico de 21 átomos de carbono, origi- nado a partir de la condensación del ácido olivetólico con el geranil pirofosfato (GPP) mediante una reacción catalizada por la enzima geraniltransferasa. Esta biosíntesis da lugar al ácido cannabigerólico (CBGA), el precursor común a partir del cual se derivan, por rutas enzimáticas específicas, los prin- cipales cannabinoides ácidos como THCA, CBDA y CBGA, que posteriormente pueden descarboxilarse térmicamente a sus formas neutras: THC, CBD y CBG. La estructura quí- mica de los fitocannabinoides los hace es- pecialmente adecuados para ser analizados mediante espectroscopía NIR. Desde el Centro Tecnológico Nacional Agroalimentario (CTAEX) se ha desarrollado y validado la aplicación de la espectrosco- pía NIR para la cuantificación directa de cannabinoides en flor seca y aceites/extrac- tos de cannabis, sin necesidad de reactivos químicos ni extracción previa. El desarrollo de cada modelo de predicción mediante espectroscopía NIR para cada matriz se ha basado en la correlación estadística entre los espectros NIR de una amplia colección de muestras y sus valores de referencia, ob- tenidos mediante técnicas analíticas están- dar. En el caso de CTAEX, estos valores de referencia se obtuvieron mediante la técni- ca HPLC, siendo el único laboratorio acredi- tado bajo la norma ISO 17025 para el aná- lisis de cannabinoides en flor de cannabis medicinal, aceites y extractos. La adecuada preparación de las muestras se consideró un factor crítico, ya que mejora significati- vamente la repetibilidad y la precisión del análisis, lo que a su vez permite una corre- lación más sólida con los modelos de cali- bración utilizados para la cuantificación de cannabinoides. Para las muestras vegetales sólidas, como la flor, el acondicionamiento de las mues- tras previo al análisis NIR incluye etapas fun- damentales como el secado controlado, con el fin de reducir la humedad y el triturado y tamizado, con el fin garantizar la homoge- neidad de las muestras. Para el desarrollo del método y los modelos de predicción de cannabinoides (CBDA, THCA,CBGA, CBG, CBD, THC, CBN y CBC) en muestras vegeta- les se ha utilizado más de 4600 muestras, abarcando un rango de 0.1-30% que varía según el cannabinoide. Las muestras líquidas y viscosas, como aceites y extractos, deben presentarse de la forma más homogénea posible, evitando burbujas en la superficie. Para realizar esta medida, a diferencia de la reflectancia utili- zada en sólidos, se utiliza la técnica de trans- felectancia añadiendo un reflector de oro en la parte superior, lo que permite que el haz que atraviese la muestra y retorne a través de la misma tras rebotar en el reflector. Este doble paso de la luz aumenta la sensibili- dad y representatividad de la muestra. Para el desarrollo del método y los modelos de predicción (CBD, CBG, CBN, THC) en acei- tes y extractos se han utilizado más de 500 muestras, abarcando un rango de 0.1-45% que varía según el cannabinoide. La mayoría de los modelos desarrollados alcanzaron coeficientes de determinación (R²) superiores a 0.95, con un sesgo (bias) cercano a cero y un error de predicción (RMSEP) aceptable dentro del rango anali- zado en ambas matrices, lo que indica que el método NIR es preciso y robusto para la cuantificación de los analitos estudiados. El amplio número de muestras analizadas, junto con el amplio rango de concentración de los cannabinoides evaluados, ha permi- tido desarrollar un método robusto y fiable mediante espectroscopía NIR. La utilización de valores de referencia obtenidos a través de una técnica acreditada, como el HPLC realizada en un laboratorio certificado bajo la norma ISO 17025, proporciona una base sólida que facilita la futura acreditación de esta metodología NIR, garantizando su validez y aplicabilidad en análisis rutina- rios de cannabinoides en flor de cannabis medicinal. Aunque la espectroscopía NIR no es tan precisa como técnicas cromatográficas tra- dicionales, el buen desarrollo de un método NIR ofrece importantes ventajas para el aná- lisis de cannabis, especialmente en etapas intermedias del cultivo. Esta técnica rápida, no destructiva y de bajo costo permite un control y monitoreo continuo de la produc- ción, facilitando la detección temprana de variaciones en la composición de cannabi- noides y la identificación del momento óp- timo de cosecha. De esta manera, el uso de NIR contribuye a optimizar los procesos de producción, logrando lotes más homogéos y consistentes, lo que resulta fundamen- tal para garantizar la calidad y eficacia del producto final en la industria del cannabis medicinal. Como siguientes pasos, se ha realizado un estudio preliminar utilizando un equipo por- tátil de espectroscopía NIR para la medición directa en flor fresca. Los resultados obteni- dos hasta ahora son prometedores, demos- trando que esta aproximación también po- dría ofrecer un método rápido y directo para el análisis in situ ◉ calidad 41 FARMESPAÑA INDUSTRIAL · ESPECIAL CANNABIS MEDICAL